DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

BRUCELOSIS


Diagnóstico Directo:
La bacteriología rutinaria ante sospechas de brucelosis debe incluir la tinción de improntas además de mediante la técnica de Gram, con la específica de Stamp, y el aislamiento en medios de cultivo selectivos como el Farrel y el Thayer Martin modificado que, al incluir en su composición antibióticos y antifúngicos para evitar contaminaciones, son idóneos para el aislamiento de brucelas de muestras que, frecuentemente, están contaminadas con otros microorganismos. La tinción de improntas mediante la técnica de Stamp, si es positiva, es presuntiva, siendo imprescindible el aislamiento, para que el diagnóstico sea definitivo.
 

BRUCELOSIS: Brucelas, tinción de Stamp positiva.


BRUCELOSIS: B. suis: crecimiento en medio selectivo de Farrel.

 

BRUCELOSIS: B. suis: crecimiento en Agar Sangre.


En ocasiones a partir de muestras fetales (hígado, pulmón, bazo y contenido gástrico) es posible realizar el aislamiento en medios nutritivos comunes como el Agar Sangre.


BRUCELOSIS: Toma de muestra vaginal mediante hisopo.

 

Se consideran muestras de elección las secreciones vaginales tras parto y/o aborto, así como leche e incluso semen. La excreción de brucelas por vagina se produce de forma masiva incluso hasta 30 días post parto. La eliminación por leche suele realizarse de forma poco intensa y discontinua, por lo que en ocasiones el aislamiento no resulta exitoso. Es frecuente, al igual que en otras especies, que no exista aislamiento positivo a partir del feto y sí lo haya a partir de escobillones de exudados fetales, como consecuencia de la infección placentaria (placentitis) pero no fetal.


A partir de matadero, la toma de muestras de ganglios retromamarios, iliacos y retrofaríngeos, bazo, glándula mamaria y útero, y tras realizar un macerado, también pueden ser muy útiles.

Por otro lado, y a pesar que algunos autores indican que la congelación de muestras y órganos no influye en la viabilidad de las bacterias en las muestras, al menos durante un cierto tiempo, nuestro criterio es realizar el análisis bacteriológico lo antes posible.


Diagnóstico indirecto
Serológico: detectamos la respuesta inmune mediada por anticuerpos, mediante técnicas serológicas.

Todos los biovares de Brucella suis que afectan al cerdo poseen el mismo antígeno A inmunodominante que la mayoría de los biovares de Brucella abortus. Por esta razón los biovares de B. abortus resultan apropiados para el análisis de sueros porcinos (O.I.E. 3.5.2.); por ello el uso del Rosa de Bengala y otras técnicas, aunque no empleen antígeno brucelar porcino, puede resultar apropiado.

BRUCELOSIS: Rosa de Bengala modificado (Dilución 75 µl de suero problema / 25 µl de Rosa de Bengala). ®

 


En brucelosis porcina se han empleado multitud de pruebas serológicas: Aglutinación en Tubo, Microaglutinación en Placa, Aglutinación Rápida (Rosa de Bengala), Fijación del Complemento, Inmunodifusión Radial, ELISA-indirecto y ELISA-competición.

 

El empleo de pruebas serológicas en el diagnóstico de la brucelosis porcina, presenta la ventaja de que son sensibles y aplicables a un gran número de muestras y el inconveniente de su baja especificidad y de no estar debidamente estandarizadas en porcino.

La existencia de reacciones serológicas cruzadas con otras bacterias gram negativas, con gran similitud en el lipopolisacárido externo como Yersinia enterocolítica serotipo O9, algunos serotipos de Salmonella y E. coli, Francisella tularensis, etc. puede originar la aparición de falsos positivos.

¬ BRUCELOSIS: inmunodifusión radial (izquierda) y Difusión Doble (derecha).


Las pruebas de diagnóstico indirecto que valoran la respuesta inmune mediada por células, sí evitan la inespecificidad de la serología. La prueba de estimulación linfocitaria, el y-interferón y la prueba de hipersensibilidad retardada (para esta prueba ver apartado anterior) son tres métodos que están infravalorados, pero que poseen una especificidad elevadísima.

TUBERCULOSIS


En el análisis histológico se observan células gigantes multinucleadas, células tipo Langhans y los característicos granulomas tuberculosos con focos de necrosis central, rodeados de las típicas células inflamatorias.

La tinción de improntas mediante las técnicas de Zielh-Neelsen o de la Auramina ayuda a orientar el diagnóstico. La evidencia de bacterias Zielh-Neelsen o Auramina positivas en lesiones, representa un diagnóstico asertivo de la enfermedad, si bien cabe señalar que la cantidad de micobacterias que existe en las muestras patológicas es directamente proporcional al grado de lesión exudativa. En las lesiones proliferativas en no pocas ocasiones no se observan bacilos o, si los hay, aparecen en muy bajas cantidades.


TUBERCULOSIS: Células de Langhans (Hematoxilina-Eosina).

 

TUBERCULOSIS: Zielh-Neelsen (tinción positiva).


El aislamiento en diversos medios de cultivo específicos, previa descontaminación de la muestra, es, como en casi todos las enfermedades de etiología bacteriana, un paso esencial para poder obtener un diagnóstico seguro, a pesar de ser un proceso lento y engorroso en estas bacterias. Aunque en la actualidad, en laboratorios preparados, se dispone de técnicas de PCR, éstas, por el momento no pueden sustituir al cultivo e identificación tradicionales, en el proceso global del diagnóstico, aunque permiten encuadrar el mismo, tras el aislamiento, de una forma más rápida.

Si bien la serología no tiene interés en colectivos porcinos, la valoración de la respuesta de tipo celular de forma indirecta mediante la técnica del Y-Interferón, se ha mostrado en nuestras manos tremendamente eficaz para la realización de campañas de saneamiento de explotaciones en extensivo, si bien es una técnica que debe ser realizada en laboratorios con experiencia y medios suficientes para su correcto desarrollo.

 

TUBERCULOSIS: M. bovis: crecimiento en medio sólido en tubo.


MAL ROJO


Histológicamente se observa un aumento de permeabilidad vascular y la presencia de microtrombos en capilares, que ocasionan necrosis isquémica perivascular con coagulopatía generalizada y estado de "shock".

El diagnóstico serológico carece de interés, mientras que el diagnóstico microbiológico es definitivo. La tinción de improntas de órganos vitales y sangre (con la observación de bacilos cortos Gram positivos), es meramente orientativa. En Agar Sangre se pueden observar colonias circulares muy pequeñas y débilmente hemolíticas tras 48 horas de incubación.


MAL ROJO: Impronta (tinción de Gram).

 

MAL ROJO: E. rhusiopathiae, crecimiento en Agar Sangre.

Imprimir

« 7. Diagnóstico Clínico Diferencial